揚州水產運輸聯盟

收藏!樣本采集指南

GCBI知識庫2020-02-26 10:56:51

快,關注這個公眾號,一起漲姿勢~

咱們科研人的日常是什么?


看文獻!看文獻!做實驗!還有…實驗失敗重新做實驗!


也是Real令人心疼了。大家天天看文獻,做實驗,再看文獻,做實驗,有時候可能忽略了最最基礎的步驟---采樣。樣本是后續一切的基礎,樣本都沒取好,實驗結果怎么能好呢?


超貼心的小編這里整理了取樣方法給大家參考。


取樣基本原則

代表性和一致性原則


實驗組與對照樣本在取材部位、時間處理過程等方面盡可能保持一致,從而保證實驗的可信度。


迅速性原則


樣本質量是影響實驗結果的重要因素,因此用于研究的樣本,在采集、制備、貯存、運輸過程中應盡可能地做到迅速,最大限度的縮短樣本從采集到實驗的時間。


低溫原則


所取樣本離體后,如有分離步驟應在4 ℃或冰上等低溫條件下進行,分離好的樣本立即置于液氮、干冰或-80 ℃冰箱中,并保證在實驗前始終處于-70 ℃以下,以免樣本產生進一步代謝活動。



取樣方法參考

組織樣本

抽提核酸類型:DNA、RNA

組織量:100mg

具體取樣步驟:

  1. 準備好凍存管,用油性記號筆在管壁標清楚樣本信息;

  2. 準確切取所需部位的組織,最好切為細長薄塊;

  3. 在RNase-free的0.9%生理鹽水中迅速漂洗樣品,以去除血漬和污物;

  4. 迅速放入凍存管,旋上蓋子,迅速投入液氮冷凍15min以上;(或者迅速將組織完全浸入組織保存液中)

  5. 將凍存管裝入樣品袋,標記清晰;

  6. ?將樣品袋轉移到干冰或-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

貼壁細胞樣本

抽提核酸類型:DNA

細胞量:1X10^6個

參考取樣步驟:

  1. 可用刮棒刮取或胰酶消化,離心收集細胞;

  2. 使用油性記號筆標記清楚樣本信息;

  3. 直接抽提DNA或轉移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

抽提核酸類型:RNA

細胞量:1X10^6個

參考取樣步驟:

  1. 貼壁細胞培養或處理結束后,去除培養液;

  2. 按每10cm^2培養面積加1mL TRIZOL試劑的比例加入TRIZOL試劑;

  3. 用1mL槍頭反復吹打,使TRIZOL接觸所有長有細胞的培養瓶表面以進行充分消化;

  4. 轉移到RNase-free的EP管中反復吹打細胞直至看不見成團的細胞塊,整個溶液應該為清亮而不粘稠的狀態;

  5. 使用油性記號筆標記清楚樣本信息;

  6. 轉移至干冰或-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

懸浮細胞樣本

抽提核酸類型:DNA

細胞量:1X10^6個

參考取樣步驟:

  1. 懸浮細胞培養或處理結束后,離心(1500g,4℃離心10min)去除培養液;

  2. 將保留的細胞用PBS緩沖液快速洗一次,離心除去PBS緩沖液,收集細胞;

  3. 使用油性記號筆標記清楚樣本信息;

  4. 直接抽提DNA或轉移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

抽提核酸類型:RNA

細胞量:1X10^6個

參考取樣步驟:

  1. 懸浮細胞培養或處理結束后,離心(1500g,4℃離心10min)去除培養液;

  2. 保留的細胞用PBS緩沖液快速洗一次,離心除去PBS緩沖液;

  3. 按照每10^6個細胞加1mLTRIZOL的比例加入TRIZOL試劑,反復吹打細胞直至看不見成團的細胞塊,整個溶液呈清亮而不粘稠的狀態;

  4. 使用油性記號筆標記清楚樣本信息;

  5. 轉移至干冰或-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

全血樣本

抽提核酸類型:DNA

全血量:2mL

參考取樣步驟:

  1. 用(非肝素鈉)抗凝管采取血液樣本;

  2. 使用油性記號筆標記清楚樣本信息;

  3. 轉移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

抽提核酸類型:RNA

全血量:2mL

參考取樣方法1:

  1. 提前準備3倍體積的TRIZOL LS (Invitrogen);

  2. 用(非肝素鈉)抗凝管采集血液樣本;

  3. 將抗凝血加至TRIZOL LS(裂解液)中,迅速立即搖勻;

  4. 使用油性記號筆標記清楚樣本信息;

  5. 裂解液室溫均勻裂解10min后,轉移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

參考取樣方法2(?推薦):

  1. 采用PAXgene Blood RNA Tube 采集全血;

  2. 采集血液后,立即上下顛倒10次以上混勻;

  3. 使用油性記號筆標記清楚樣本信息;

  4. 室溫放置至少2小時后,轉移至4℃或-20℃過夜放置。足量干冰寄送。


血漿樣本

抽提核酸類型:DNA

樣本量:1mL

參考取樣步驟:

  1. 用(非肝素鈉抗凝的)真空采血管采集血液樣本,2小時內進行血漿分離;

  2. 3000rpm/min,室溫離心10min,收集上清至1.5mL/2mLEP管;

  3. 使用油性記號筆標記清楚樣本信息;

  4. 轉移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

抽提核酸類型:RNA

樣本量:1mL

參考取樣步驟:

  1. 用(非肝素鈉抗凝的)真空采血管采集血液樣本,2小時內進行血漿分離;

  2. 3000rpm/min,離心10min,收集上清,0.2mL/管分裝至1.5mL/2mLEP管;

  3. 加入3倍體積的TRIZOL(裂解液),立即用力搖勻;

  4. 使用油性記號筆標記清楚樣本信息;

  5. 裂解液均勻裂解10min后,轉移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

血清樣本

抽提核酸類型:DNA

樣本量:1mL

參考取樣步驟:

  1. 用離心管(不抗凝)采集血液樣本,37℃(或室溫)靜置1小時凝固分層;

  2. 3000rpm/min,離心10min,收集上清,分裝至1.5mL/2mLEP管;

  3. 使用油性記號筆標記清楚樣本信息;

  4. 轉移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

抽提核酸類型:RNA

樣本量:1mL

參考取樣步驟:

  1. 用(?不需要抗凝的)真空采血管采集血液樣本,盡快進行血清分離;

  2. 3000rpm/min,離心10min,收集上清,0.2mL/管分裝至1.5mL/2mLEP管;

  3. 加入3倍體積的TRIZOL(裂解液),立即用力搖勻;

  4. 使用油性記號筆標記清楚樣本信息;

  5. 裂解液室溫均勻裂解10min后,轉移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

外泌體樣本

抽提核酸類型:DNA

樣本量:4mL血漿/血清、20mL細胞上清分離得到的外泌體

參考取樣步驟1(交由我司分離外泌體):

  1. 收集待分離外泌體的血清/血漿,體液或細胞培養液;

  2. 3000rpm/min,離心10min,去除樣品中的雜質等物質;

  3. 吸取上清,使用油性記號筆標記清楚樣本信息;

  4. 轉移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

參考取樣步驟2(客戶自行分離外泌體)

  1. 按照自己摸索的方法進行外泌體分離;

  2. 使用油性記號筆標記清楚樣本信息;

  3. 轉移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

抽提核酸類型:RNA

樣本量:4mL血漿/血清、20mL細胞上清分離得到的外泌體

參考取樣步驟1(交由我司分離外泌體):

  1. 收集待分離外泌體的血清/血漿,體液或細胞培養液3000rpm/min,離心10min,去除樣品中的雜質等物質;

  2. 吸取上清,使用油性記號筆標記清楚樣本信息;

  3. 轉移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

參考取樣步驟2(客戶自行分離外泌體)

  1. 按照自己摸索的方法進行外泌體分離;

  2. 向外泌體沉淀中加入少量PBS(<500μl),混勻;

  3. 加至裝有5倍TRIZOL(裂解液)的管中,立即用力搖勻;

  4. 使用油性記號筆標記清楚樣本信息;

  5. 裂解液室溫均勻裂解10min后,轉移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

備注:外泌體樣本如需進行NTA檢測,分離后加PBS(高純度)重懸,直接寄送即可(不需加裂解液)。

想了解更多關于外泌體研究的信息,請戳↓↓

一文帶你了解外泌體研究

外泌體研究,用血漿還是血清?

視頻講座丨這么受國自然青睞的外泌體研究,你還不快到碗里來

納米顆粒跟蹤分析(NTA)視頻講座--帶你發現更好的外泌體表征

乳汁、鼻涕、唾液等外泌體取樣中的這些小眾樣本取樣注意事項,你了解了嗎?

給我一個心,可以不可以

天天盈配资