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人間最美四月天,不負春光和實驗

美吉生物2020-02-23 12:13:29

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四月,

桃花夭夭,

淥水盈盈,

萬象始更新,

是春天中的春天。

然鵝。。。

在這個盎然春意的時節里,經歷剛剛的開題之后,筒子們開始蘇醒,伸展筋骨開始準備實驗材料,進入實驗狗的階段。但是面對形形色色的材料,卻無處下手。莫慌,聰慧的小美幫你解決這些小case。

1

什么樣的材料算是自然群體材料呢?


自然界收集而來的,彼此間沒有一定的親緣關系,又分別分布在一定區域并適應當地環境的一類材料為自然群體材料,例如不同地域生長環境下的山雀。

2

家系群體的特征是什么?


從種質資源中挑選的有目標性狀差異的兩個材料,作為親本(父母本),雜交之后構建的具有表型分離的一群子代個體集合的一類材料為家系群體材料。符合這樣子的群體類型有F1、F2、BC、RIL等,小美提醒大家:一般這樣的群體在做實驗的時候最好準備>150個個體,越多越好吶!

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植物樣本取材注意哪些呢?


采摘新鮮幼嫩的葉片、鮮艷的花朵、成熟的種子2g左右,優先選擇幼嫩的葉片,因為果實、種子、花及其他組織中有多重化學成分,影響基因組DNA提取的質量。取完的葉片先用75%的酒精擦拭組織的表面,去離子水沖洗3次,吸干水分,至于錫箔紙或者封口袋中并標注,立即液氮速凍,低溫保存,干冰運輸。

4

動物樣本取樣時注意哪些呢?


動物的肌肉、肝臟組織是最適的取材部位,組織部分總量2g左右。取材后,用PBS0.9%生理鹽水漂洗,以去除血漬和污物,并剔除結締組織和脂肪組織等,吸干水分,液氮速凍,低溫保存,干冰運輸。

5

血樣有什么要求?


取外周靜脈血2ml,血細胞總量滿足大于106,加入抗凝劑檸檬酸EDTA(乙二胺四乙酸二胺),2-8℃保存,生物冰袋運輸;-20℃-70℃保存,干冰運輸。

6

5


如果送DNA的話,根據不同的實驗有具體不同的要求?


針對目前群體遺傳學研究中利用的兩種測序技術:重測序和簡化基因組,這兩種測序方式不同,針對DNA樣本的需求是不同的。重測序(PE文庫)建庫要求的DNA總量大于2ug,質量濃度>25ng/ul;簡化基因組(RADGBS)測序建庫的DAN總量大于800ng,質量濃度>10ng/ul。置于1.5ml2.0ml的離心管內,生物冰袋或者干冰運輸就可以了。

7

DNA樣本質檢要經歷那些關卡?


符合高通量測序建庫要求的DNA樣本是需要經過重重檢驗的,這里的多重關卡包括DNA的純度、濃度、完整性DNA總量檢驗等。利用NanoDrop2000檢驗其純度,利用TBS-380檢驗其濃度,利用1%瓊脂糖凝膠電泳檢驗其完整性,根據三者的結果計算DNA總量。

8

質檢中我們常常見到的230、260、280分別是什么指標?


260指核酸(DNARNA);280代表蛋白;230代表鹽離子及其他有機化合物(多糖)。當OD260/2801.8時,可能是蛋白污染所致,這個時候可以通過增加酚抽提消除這種影響;當OD260/2302.0時說明可能有鹽和苯酚殘留,可以再次沉淀和利用70%的乙醇進行洗滌去除以上殘留物質。


小美為你總結的8FAQ,是不是解決了以往困擾你的小問題呢?

如果上述的答案沒有解決你實驗準備階段的一些問題,你可以加入我們的QQ群(474441739),那里匯聚了全國各地科研大牛,大家一起探討實驗,分享彼此經驗,共同著力科研,解決科研難題。

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溫馨提示


著一襲淡綠的薄紗,染一身典雅的芳菲,

春天就這么從清新婉約的風韻中走來,

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53-5號基于高通量測序技術的基因定位培訓班



臨淵羨魚,不如來美吉,授您以漁?。?!


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